使用前經過清潔消毒，LB培養基清潔與否對工作影響較大，可影響培養基的酸鹼度，若有某些化學藥品的存在，會抑制細菌的生長。新購的培養基應先用熱水沖洗，再置于 1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數小時，使游離鹼性物質除去(或用砂皂洗刷)，再用蒸餾水沖洗二次，若要培養細菌再用高壓蒸氣滅.菌(一般在15磅高壓蒸氣)，即120 ℃的溫度下30分鐘滅菌，置室溫中于燥，或用干熱滅菌，就是將培養基置于烘箱內，溫度控制在120 ℃左右的情況下維持2小時，即可殺死細菌的胞芽。經過消毒的培養基才能接種培養使用。
LB培養基通常使用固體培養基制成平板培養(就是平板皿名稱的由來)，平板培養基制作是將已裝好的滅菌瓊脂培養基，用溫水(無菌)熔化，取下試管的棉花塞，管口于酒精燈火焰上通過，然后微啟滅菌的培養基蓋，使試管口能深入為宜，傾入培養基后即可蓋密，再輕輕的搖勻傾入的培養基，使之均勻的、分布于皿底上疑結，即得平板培養基。由于細菌的繁殖、發育生長是與所供給的培養基(營養)有直接關系，尤其是作定量檢驗分祈，對提供營養物的多少，有決定意義，細菌培養時對營養物提供的多少，是否均勻，這對于培養基、皿底是否平整極為重要。如培養基皿底不平，瓊脂的培養基分布的厚薄隨坩喬皿皿底是否平整而有厚有薄，薄的部分營養供給就不足，這對定量分析有著密切關系，故對定量培養基皿底要求特別平整的原因所在。但作一般定性培養基(檢驗細菌、菌落生長、繁殖等)，使用普通培養基即可。
細菌的分離培養，一般標本中常同時混有數種細菌，如口腔咽喉菌及耳朵的分泌物、痰液、小便、大便等，凡需研究的細菌，須先用分離培養法，使其成為純培養，通過對一細菌作純培養，用肉汁加2%瓊脂的固體培養基，經保溫漏斗以脫脂棉花過濾，注入試管中，二天后檢驗新菌，再投入培養基內，先制成平板，在無菌的條件下進行接種，接種后把培養基倒置移入25一一30 ℃的恒溫箱內(倒置是避免水蒸氣凝成液滴滴人皿底內，影晌菌落的生長)，通過培養進一步觀察細菌的形態和色澤，研究致病的病菌，以及對它防治的效果。
